行業(yè)新聞
恒遠生物|人角膜上皮細胞系培養(yǎng)建議
品牌: 恒遠生物
貨號: HYCC10463
中文名稱：人角膜上皮細胞系
英文名稱：HCE-T
規(guī)格: T25
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
培養(yǎng)條件: F12K+10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
凍存條件: 無血清細胞凍存液
特別說明：本庫的細胞系（株）僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的。使用者不得將本庫細胞系（株）轉(zhuǎn)讓給第三者。
一、細胞收到后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)某Ｒ娹k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基），若是5%CO2的培養(yǎng)箱，可用密封培養(yǎng)瓶，擰緊瓶蓋后放入5%CO2培養(yǎng)箱，48H內(nèi)要換液一次。
二、細胞培養(yǎng)常見問題解答
1.培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?
因為培養(yǎng)基加了酚紅來顯示顏色，指示pH范圍為6-8，顏色會由黃變?yōu)樽霞t。這是為了我們能更直觀觀察培養(yǎng)液的變化，如變黃，則代表偏酸，偏堿性了就顯示偏紫色。一般來說，細胞吸收營養(yǎng)后，變黃后就暗示我們要換培養(yǎng)基啦!所以密切觀察很重要哦!
2.細胞的居住環(huán)境
舒適無菌的環(huán)境是細胞健康生活的重要基礎(chǔ)。如下圖為培養(yǎng)細胞的器皿，包括形狀、規(guī)格、用途多樣的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)板。最終住進37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱。
3.細胞培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶區(qū)別?
就細胞培養(yǎng)狀態(tài)來說，培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿沒有太大區(qū)別，主要在于安全系數(shù)(培養(yǎng)瓶>培養(yǎng)皿)、培養(yǎng)細胞數(shù)量(大培養(yǎng)瓶>培養(yǎng)皿)。但是培養(yǎng)瓶成本也會相對較高，因此無特殊要求，一般選擇培養(yǎng)皿即可。
4.為什么細胞復蘇后，很多難以貼壁?
忽略培養(yǎng)基的問題，主要考慮細胞凍存時狀態(tài)差或者復蘇時動作太慢導致細胞死亡。切記最重要的融化速度要快，可不時搖動冷凍管，使之盡快通過最易受損的溫度段(-5～0℃)。
5.細胞凍存時對細胞量有要求嗎?
細胞復蘇時會有一定的細胞死亡，因此細胞的濃度應(yīng)足夠高，起始濃度106—107個/ml/管。
6.細胞污染怎么辦?
如發(fā)現(xiàn)細胞有污染，一般建議丟棄。如果細胞非常寶貴，可試著加入含抗生素的培養(yǎng)基反復清洗，并用抗生素含量高的培養(yǎng)基培養(yǎng)，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。
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